Приведен обзор публикаций о сканирующей ион-проводящей микроскопии с целью изучения истории развития этого метода, его особенностей и областей применения.

УДК 621.385.833, ВАК 05.11.13, DOI: 10.22184/1993-8578.2017.78.7.42.46

sitemap
Наш сайт использует cookies. Продолжая просмотр, вы даёте согласие на обработку персональных данных и соглашаетесь с нашей Политикой Конфиденциальности
Согласен
Поиск:

Вход
Архив журнала
Журналы
Медиаданные
Редакционная политика
Реклама
Авторам
Контакты
TS_pub
technospheramag
technospheramag
ТЕХНОСФЕРА_РИЦ
© 2001-2025
РИЦ Техносфера
Все права защищены
Тел. +7 (495) 234-0110
Оферта

Яндекс.Метрика
R&W
 
ISSN 1993-8578
ISSN 2687-0282 (online)
Книги по нанотехнологиям
 
Вход:

Ваш e-mail:
Пароль:
 
Регистрация
Забыли пароль?
Книги по нанотехнологиям
Под редакцией д.т.н., профессора Мальцева П.П.
Под ред. Л.И. Трахтенберга, М.Я. Мельникова
Другие серии книг:
Мир материалов и технологий
Библиотека Института стратегий развития
Мир квантовых технологий
Мир математики
Мир физики и техники
Мир биологии и медицины
Мир химии
Мир наук о Земле
Мир электроники
Мир программирования
Мир связи
Мир строительства
Мир цифровой обработки
Мир экономики
Мир дизайна
Мир увлечений
Мир робототехники и мехатроники
Для кофейников
Мир радиоэлектроники
Библиотечка «КВАНТ»
Умный дом
Мировые бренды
Вне серий
Библиотека климатехника
Мир транспорта
Мир фотоники
Мир станкостроения
Мир метрологии
Мир энергетики
Книги, изданные при поддержке РФФИ
Выпуск #7/2017
А.Ахметова, И.Яминский
Сканирующая капиллярная микроскопия
Просмотры: 3827
Приведен обзор публикаций о сканирующей ион-проводящей микроскопии с целью изучения истории развития этого метода, его особенностей и областей применения.

УДК 621.385.833, ВАК 05.11.13, DOI: 10.22184/1993-8578.2017.78.7.42.46
Первая публикация о сканирующей капиллярной микроскопии вышла в 1989 году [1]. Статья П.Хансма, Б.Дрейка и О.Марти в журнале Science "Сканирующий ион-проводящий микроскоп" заложила основу для развития нового направления в микроскопии. Сканирующий ион-проводящий микроскоп (СИПМ) был разработан для отображения топографии поверхностей в электролите. Зондом микроскопа является заполненная электролитом микропипетка. Поток ионов через отверстие микропипетки уменьшается на небольшом расстоянии от поверхности. Механизм обратной связи может использоваться для поддержания заданной проводимости с одновременным определением расстояния до поверхности. В статье также была высказана мысль, что СИПМ может отображать не только топографию, но и локальные ионные токи через поры на поверхности.
В своей следующей публикации Хансма с коллегами предложил совмещенный атомно-силовой и ион-проводящий микроскоп. Конструкция основана на использовании изогнутой стеклянной пипетки, которая действует как датчики силы и проводимости. Измерение отклонения пипетки позволило получить более стабильную обратную связь, чем возможно было в предыдущих версиях СИПМ. С помощью комбинированного микроскопа были исследованы синтетические мембраны в режимах контакта и тэппинга в жидкости. Пипетки были изготовлены из боросиликатного стекла или кварцевых капиллярных трубок. Хотя боросиликатное стекло оказалось удобным и простым в обращении, Хансма и его коллеги получили наивысшее разрешение и высокую воспроизводимость, используя вытянутые кварцевые трубки (Nanonics, Израиль). В статье указано, что, хотя работа в режиме контакта возможна, но более высокий контраст и менее заметное повреждение образца при получении изображений топографии и ионной проводимости обеспечиваются в режиме тэппинга [2].

Годом позже проф. Корчев с коллегами опубликовал работу о сканирующей ион-проводящей микроскопии живых клеток, которая позволяет изучать топографию, не повреждая образец. Изображения напоминают снимки, полученные с помощью сканирующей электронной микроскопии, с существенной разницей в том, что клетки остаются жизнеспособными и активными. Прибор может контролировать мелкомасштабную динамику клеточных поверхностей, а также движение целых клеток [3].
В работе [4] были проведены опыты с меланоцитами мышей, которые показали, что СИПМ наиболее подходит для визуализации образцов, погруженных в водные растворы. Поскольку зонд измеряет ионный ток без физического контакта с образцом во время сканирования, то не требуется предварительной подготовки клеток (фиксация на подложке).
СИПМ состоит из четырех основных компонентов: ионно-чувствительного стеклянного зонда (микропипетки), заполненного электролитом; сканирующей пьезоэлектрической системы; специализированного электронно-измерительного оборудования, включающего систему обратной связи; цифровой электроники и компьютера, который обеспечивает пользовательский интерфейс для микроскопа, управление системой, а также позволяет выполнять обработку полученных данных. Уже тогда предсказывалось, что СИПМ потенциально может быть применим для исследований в реальном времени в электрофизиологии, при проведении микроманипуляций и доставки лекарств.
В [5] показано, что СИПМ может измерять изменения в объеме клеток в диапазоне от 10–19 до 10–9 литра.
В [6] представлен гибрид СИПМ и сканирующей ближнепольной оптической микроскопии. Этот метод позволяет выполнять количественный анализ поверхности ячейки с высоким разрешением и проводить одновременную запись топографических и оптических изображений. Особенностью метода является надежный механизм управления расстоянием между зондом и образцом в физиологическом буфере.
В работе [7] проведено сравнение сканирующей ион-проводящей и атомно-силовой (АСМ) микроскопии. В качестве модельных образцов для сравнения возможностей АСМ- и СИПМ-визуализации использовались микроворсинки живых клеток A6. Качество АСМ-изображений значительно улучшилось после фиксации клеток, в то время как на СИПМ-снимках оно не изменилось. В АСМ измеренная высота и ширина целых клеток зависели от значения силы, в то время как в СИПМ они были постоянными в пределах большого диапазона заданных значений. Таким образом, было показано, что получение точной топографии живых клеток в АСМ возможно только с использованием режима силового картирования, который, помимо определения механических свойств образца, обеспечивает изображение "нулевой силы" или "высоты контакта" ячейки. Однако скорость формирования изображения в жидкости обычно ограничена несколькими пикселями в секунду, что требует достаточно много времени для его получения с необходимым разрешением.
В статье [8] подробно описаны три распространенных метода обратной связи в СИПМ: постоянного тока (dc), переменного тока (ac) и прыжковый режим.
Разрешение в СИПМ определяется геометрией наконечника пипетки и расстоянием между пипеткой и образцом. Типичное значение достигаемого разрешения составляет около 10 нм по вертикали и около 50 нм в поперечном направлении [9]. Наилучшее разрешение (3–6 нм) было получено при визуализации белков S-слоя из Bacillus sphaericus на поверхности слюды с нанопипеткой диаметром 13 нм [10].
В [11] использовали прыжковый режим ион-проводящей микроскопии, позволяющий регулировать угол, под которым нанопипетка приближается к клетке. Угол может быть отрегулирован в диапазоне 0–90⁰ к поверхности.
В дополнение к наблюдению топографии с высоким разрешением СИПМ может выполнять многофункциональный анализ живых клеток, включая морфологические трансформации, вызванные физиологическими воздействиями, идентификацию внутриклеточных сигнальных путей и определение характеристик механических ответов, что демонстрирует универсальность метода.
С помощью СИПМ были исследованы желудочковые миоциты, полученные из ткани сердец [12], подвергшихся длительной механической разгрузке [13] или рассечению, вызванному осмотическим шоком [14]. Во всех этих случаях СИПМ выявил очевидные изменения в структуре поверхности по сравнению с изображениями миоцитов здоровой ткани.
В работе [15] продемонстрирована возможность использования нанопипетки как датчика pH.
Таким образом, мы видим, что капиллярный зонд или нанопипетка могут выступать в качестве средства доставки лекарств, электрохимического сенсора, биосенсора pH, тест-системы для обнаружения ионов металлов и многое другого. Капилляры с двумя или несколькими каналами дают также возможность реализовать направленный массоперенос веществ, биомакромолекул (пептидов, белков, нуклеиновых кислот и пр.) на поверхность биообъектов или внутрь их объема [16].
В наших исследованиях по сканирующей капиллярной микроскопии мы используем установку, встроенную в инвертированный микроскоп (Nikon, Япония, рис.1). В работе [17] с помощью СИПМ наблюдались эритроциты, и анализ полученных результатов показал, что среднеквадратичная шероховатость их поверхности равна 20 нм.
В заголовок мы вынесли название "капиллярная микроскопия", так как оно объединяет гораздо больше функций и способов применения по сравнению с термином "ион-проводящая микроскопия". СИПМ успешно развивается с разработкой новых технологий создания многоканальных капилляров для направленной модификации поверхности. Можно прогнозировать дальнейшее широкое применение ион-проводящего микроскопа в биомедицинских приложениях, тестировании лекарственных средств с использованием всего лишь одной клетки, а не их культуры [18].
Исследование выполнено при финансовой поддержке РФФИ в рамках научного проекта 17-52-560001.
ЛИТЕРАТУРА
Hansma P.K., Drake B., Marti O., Gould S.A., Prater C.B. The scanning ion-conductance microscope // Science. 243: 641–643. 1989.
Proksch R., Lal R., Hansma P.K., Morse D., Stucky G. Imaging the internal and external pore structure of membranes in fluid: TappingMode scanning ion conductance microscopy // Biophys. J. 71: 2155–2157. 1996.
Korchev Y.E., Bashford C.L., Milovanovic M., Vodyanoy I., Lab M.J. Scanning ion conductance microscopy of living cells // Biophys. J. 73: 653–658. 1997.
Korchev Y.E., Milovanovic M., Bashford C.L., Bennett D.C., Sviderskaya E.V., Vodyanoy I., Lab M.J. Specialized scanning ion-conductance microscope for imaging of living cells // J. Microsc. 188: 17–23. 1997.
Korchev Y.E., Gorelik J., Lab M.J., Sviderskaya E.V., Johnston C.L., Coombes C.R., Vodyanoy I., Edwards C.R. Cell volume measurement using scanning ion conductance microscopy // Biophys. J. 78: 451–457. 2000.
Korchev Y.E., Raval M., Lab M.J., Gorelik J., Edwards C.R., Rayment T., Klenerman D. Hybrid scanning ion conductance and scanning near-field optical microscopy for the study of living cells // Biophys. J. 78: 2675–2679. 2000.
Seifert J., Rheinlaender J., Novak P., Korchev Y., Schäffer T.E. Comparison of atomic force microscopy and scanning ion conductance microscopy for live cell imaging // Langmuir. 2015.
Chen C., Zhou Y., Baker L.A. Scanning Ion Conductance Microscopy // Annual Review of Analytical Chemistry. 2012.
Ying L.M., Bruckbauer A., Zhou D., Gorelik J., Shevchuk A., et al. The scanned nanopipette: a new tool for high-resolution bioimaging and controlled deposition of biomolecules // Phys. Chem. Chem. Phys.7: 2859–66. 2005.
Shevchuk A.I., Frolenkov G.I., Sanchez D., James P.S., Freedman N., et al. Imaging proteins in membranes of living cells by high-resolution scanning ion conductance microscopy // Angew. Chem. Int. Ed. 45: 2212–16. 2006.
Leo-Macias A., Agullo-Pascual E., Sanchez-Alonso J.L., Keegan S., Lin X., Arcos T., Feng-Xia-Liang, Korchev Y.E., Gorelik J., Fenyo D., Rothenberg E., Delmar M., et al. Nanoscale visualization of functional adhesion/excitability nodes at the intercalated disc // Nature Communications, Vol: 7, ISSN: 2041-1723. 2016.
Lyon A.R., MacLeod K.T., Zhang Y.J., Garcia E., Kanda G.K., et al. Loss of T-tubules and other changes to surface topography in ventricular myocytes from failing human and rat heart // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 106: 6854–59. 2009.
Ibrahim M., Al Masri A., Navaratnarajah M., Siedlecka U., Soppa G.K., et al. Prolonged mechanical unloading affects cardiomyocyte excitation-contraction coupling, transverse-tubule structure, and the cell surface // FASEB J. 24: 3321–29. 2010.
Gorelik J., Yang L.Q., Zhang Y.J., Lab M., Korchev Y., Harding S.E. A novel Z-groove index characterizing myocardial surface structure // Cardiovasc. Res. 72: 422–29. 2006.
Piper J.D., Clarke R.W., Korchev Y.E., Ying L., Klenerman D., et al. A renewable nanosensor based on a glass nanopipette // Journal of the American Chemical Society. Vol 128. P. 16462–16463. 2006. ISSN: 0002-7863.
Яминский И.В. Сканирующая капиллярная микроскопия // НАНОИНДУСТРИЯ. 2016. № 1(63). С. 76–79.
Макарова Е., Багров Д., Горелкин П., Яминский И. Наблюдение эритроцитов с помощью атомно-силовой и сканирующей ион-проводящей микроскопии // НАНОИНДУСТРИЯ. 2015. № 2(56). С. 42–47.
Макарова Е.С., Багров Д.В., Горелкин П.В., Ерофеев А.С., Яминский И.В. Визуализация эритроцитов методами атомно-силовой и сканирующей ион-проводящей микроскопии //Медицина и высокие технологии. 2015. № 2. С. 42–45.
 
 Отзывы читателей
Разработка: студия Green Art