eng
Выпуск #3-4/2022
И.В.Яминский, А.И.Ахметова, Т.О.Советников, М.А.Тихомирова, Шуанг Янг
СКАНИРУЮЩАЯ КАПИЛЛЯРНАЯ МИКРОСКОПИЯ: ВИЗУАЛИЗАЦИЯ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК
СКАНИРУЮЩАЯ КАПИЛЛЯРНАЯ МИКРОСКОПИЯ: ВИЗУАЛИЗАЦИЯ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК
Просмотры: 2136
DOI: 10.22184/1993-8578.2022.15.3-4.168.173
Сканирующая капиллярная микроскопия (или сканирующая ион-проводящая микроскопия) – одна из методик сканирующей зондовой микроскопии, основанная на использовании нанокапилляров. Важным преимуществом СКМ перед остальными методами является несиловое воздействие на объект исследования в процессе измерения, а также возможность проводить исследования в естественной среде – в жидкости, вследствие чего эта методика стала активно использоваться в биологических и медицинских исследованиях. Еще одним оригинальным преимуществом СКМ является использование двухканальных капилляров, что позволяет применять эту методику в качестве сенсора, например, для измерения активных форм кислорода вблизи клетки.
Сканирующая капиллярная микроскопия (или сканирующая ион-проводящая микроскопия) – одна из методик сканирующей зондовой микроскопии, основанная на использовании нанокапилляров. Важным преимуществом СКМ перед остальными методами является несиловое воздействие на объект исследования в процессе измерения, а также возможность проводить исследования в естественной среде – в жидкости, вследствие чего эта методика стала активно использоваться в биологических и медицинских исследованиях. Еще одним оригинальным преимуществом СКМ является использование двухканальных капилляров, что позволяет применять эту методику в качестве сенсора, например, для измерения активных форм кислорода вблизи клетки.
Теги: cancer cells human carcinoma mesenchymal and mesenchymal-like phenotype morphological profile scanning capillary microscopy карцинома человека мезенхимальный и мезенхимоподобный фенотип морфологический портрет раковые клетки сканирующая капиллярная микроскопия
Получено: 3.05.2022 г. | Принято: 11.05.2022 г. | DOI: https://doi.org/10.22184/1993-8578.2022.15.3-4.168.173
Научная статья
СКАНИРУЮЩАЯ КАПИЛЛЯРНАЯ МИКРОСКОПИЯ: ВИЗУАЛИЗАЦИЯ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК
И.В.Яминский1, 2, 3, д.ф.-м.н., проф. МГУ им. М.В. Ломоносова, физический и химический факультеты, генеральный директор Центра перспективных технологий, директор Энергоэффективных технологий, ORCID: 0000-0001-8731-3947 / yaminsky@nanoscopy.ru
А.И.Ахметова1, 2, 3, инженер НИИ ФХБ имени А.Н. Белозерского МГУ, ведущий специалист Центра перспективных технологий и Энергоэффективных технологий, ORCID: 0000-0002-5115-8030
Т.О.Советников1, 2, инженер, ORCID: 0000-0001-6541-8932
М.А.Тихомирова1, 5 м.н.с., ORCID: 0000-0001-5675-9188
Шуанг Янг4, проф., ORCID: 0000-0002-4779-8553
Аннотация. Сканирующая капиллярная микроскопия (или сканирующая ион-проводящая микроскопия) – одна из методик сканирующей зондовой микроскопии, основанная на использовании нанокапилляров. Важным преимуществом СКМ перед остальными методами является несиловое воздействие на объект исследования в процессе измерения, а также возможность проводить исследования в естественной среде – в жидкости, вследствие чего эта методика стала активно использоваться в биологических и медицинских исследованиях. Еще одним оригинальным преимуществом СКМ является использование двухканальных капилляров, что позволяет применять эту методику в качестве сенсора, например, для измерения активных форм кислорода вблизи клетки.
Ключевые слова: сканирующая капиллярная микроскопия, мезенхимальный и мезенхимоподобный фенотип, морфологический портрет, раковые клетки, карцинома человека
Для цитирования: И.В. Яминский, А.И. Ахметова, Т.О. Советников, М.А. Тихомирова, Шуанг Янг. Сканирующая капиллярная микроскопия: визуализация опухолевых клеток. НАНОИНДУСТРИЯ. 2022. Т. 15, № 3–4. С. 168–173. https://doi.org/10.22184/1993-8578.2022.15.3-4.168.173
ВВЕДЕНИЕ
Сканирующая капиллярная микроскопия (СКМ) успешно используется для исследования механических реакций живых клеток, например, для оценки объема живых эндотелиальных клеток под влиянием гемодинамического сдвигового напряжения в кровеносных сосудах [1] и для оценки жесткости плазматической мембраны при приложенном гидростатическом давлении [2].
Использование капилляра в качестве резервуара имеет потенциальное применение для доставки определенных молекул и терапевтических средств в конкретную клетку или субклеточную область. В этом отношении двухканальные капилляры уже использовались для доставки микрочастиц [3] и полимеров [4] в живые клетки корней растений.
В работе [5] представлена методика изготовления углеродных наноэлектродов для внутриклеточных электрохимических исследований, в частности, модификация наноэлектрода с помощью платины позволила зарегистрировать концентрацию активных форм кислорода вблизи и внутри клеток гиппокампа.
С высокой точностью осуществлялось нанесение биотинилированной ДНК на стеклянную подложку, покрытую стрептавидином, и протеина G на положительно заряженную стеклянную подложку [6]. Также возможно прецизионное нанесение на подложку фемто- и аттолитровых капель воды, при котором достигается высокая равномерность величины подачи, и, как следствие, возможно добавление одинаковых порций воды; более того, возможно добавление реагента из капилляра при сохранении объема капли [7].
Помимо возможности доставки материала на поверхность, капилляр также позволяет выполнять одноклеточную нанобиопсию путем извлечения небольшого количества материала изнутри клетки, которая затем подвергается дальнейшему анализу [8, 9]. Такое извлечение является ценным, поскольку последующий анализ может быть привязан к местоположению клетки или использоваться для сравнения свойств ряда клеток в группе.
Применимо к исследованию раковых клеток капиллярная микроскопия может дать существенную информацию для дальнейшего лечения.
Раковое заболевание обладает способностью развивать устойчивость к традиционным методам лечения, и растущая распространенность этих лекарственно-устойчивых форм онкологии требует дальнейших углубленных исследований и разработки эффективных методов лечения.
Хотя многие виды онкологии изначально подвержены химиотерапии, со временем они могут развить резистентность с помощью мутации ДНК и метаболических изменений, которые способствуют ингибированию и деградации лекарственного средства.
При исследовании людей с раком молочной железы было показано, что пациенты с опухолями, экспрессирующими высокие уровни ZEB1 (белок цинкового пальца), плохо реагировали на химиотерапию [10]. В данном случае СКМ позволяет исследовать мезенхимальный или мезенхимоподобный фенотип и сформировать морфологический портрет опухолевых клеток, определить такие признаки, как форма, шероховатость, размеры клеток и ядра, расположение ядер (наличие скученности ядер), количество внутриклеточного вещества и др.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Установка СКМ собрана на базе инвертированного оптического микроскопа Nikon Ti-U. В схеме самого микроскопа задействованы: высоковольтный усилитель, подающий сигнал на пьезокерамические подвижки; высокочувствительный усилитель ионного тока, создающий разницу потенциалов между электродами и измеряющий напряжение текущего ионного тока (усилитель имеет регулятор, позволяющий подстраивать коэффициент преобразования ток-напряжение от 0.5 до 1000 мВ/пА) и цифровой контроллер (блок управления) микроскопа, принимающий сигнал с усилителя тока и подающий управляющие сигналы на выходной усилитель, для подачи напряжения на пьезокерамический манипулятор.
Клетки карциномы человека (HeLa, Российская коллекция клеточных культур человека, животных и растений, Институт цитологии, Санкт-Петербург, Россия) выращивали в среде ДМЕМ (ПанЭко, Москва, Россия) с добавлением 10% термоинактивированной фетальной бычьей сыворотки (HyClone, Logan, UT, США), 2 мМ L-глутамина (ПанЭко, Москва, Россия) и раствора антибиотика-антимикотика (Gibco, Waltham, MA, USA). Фиксация клеток проводилась в 3,7 % параформальдегиде (PFA) в течение 10 минут, далее клетки отмывались в физрастворе (0,9 M NaCl), который в дальнейшем служил и в качестве электролитической среды в процессе сканирования.
Сканирование проводилось капилляром с выходным отверстием около 100 нм, амплитуда и частота колебаний в режиме прерывистого контакта (hopping-mode) составляли 1 мкм и 15 Гц, соответственно. Контрольная точка падения величины ионного тока составляла 1,2 % от величины тока на удалении от образца. Размер кадра 10,3 × 10,3 мкм2, разрешение 512 × 512 точек.
Постобработка снимков проводилась в ПО ФемтоСкан Онлайн [11] посредством медианной фильтрации и выравнивания уровня подложки по выбранным участкам подложки на полученном изображении.
РЕЗУЛЬТАТЫ
В инвертированном оптическом микроскопе наблюдалась организация клеточных структур на подложке: клетки собираются в островки, при этом заметны характерные отростки в местах присоединения клеток к подложке (Рис.1).
На рис.2 представлены изображения клеток, полученные с помощью сканирующего капиллярного мироскопа. Наблюдается морфология клеточной поверхности, которая также прямо указывает на организацию субмембранных структур: различимо ядрышко клетки (показано желтым градиентом), что отчетливо соотносится с данными оптической микроскопии.
На рис.4 представлены изображения отростков клетки в 2D и 3D виде.
Сканирующая капиллярная микроскопия позволяет не только визуализировать объекты в трехмерном масштабе, но и дает возможность получать и использовать ряд экспериментальных данных в диагностических целях. На основе полученных изображений измерена средняя шероховатость поверхности клеток, которая в области клеточных ядер составляет по показателю Ra = 0,4 мкм (среднее по модулю), по среднеквадратичному отклонению шероховатость Rq составила 0,5 мкм, а в области отростков 0,045 и 0,06 мкм соответственно, что практически в 10 раз меньше.
ВЫВОДЫ
СКМ имеет особую значимость в исследовании живых систем. В биоприложениях интерес могут представлять не только получение информации о морфологии объектов, измерение локальных биотоков и т.д., но и методики адресной доставки агентов к исследуемому образцу, что позволяет изучать его реакцию на внешнее воздействие и, как следствие, получать качественно новую и более значимую информацию о процессе его жизнедеятельности.
БЛАГОДАРНОСТИ
Исследование выполнено при финансовой поддержке РФФИ и Лондонского Королевского Общества № 21-58-10005, РФФИ, проект № 20-32-90036. Работа выполнена при финансовой поддержке Фонда содействия инновациям, проект № 71108, договор 0071108. Работа выполнена при содействии компании ООО "Эндор" (Москва).
ИНФОРМАЦИЯ О РЕЦЕНЗИРОВАНИИ
Редакция благодарит анонимного рецензента (рецензентов) за их вклад в рецензирование этой работы, а также за размещение статей на сайте журнала и передачу их в электронном виде в НЭБ eLIBRARY.RU.
ЛИТЕРАТУРА / REFERENCES
Potter C.M.F., Lundberg M.H., Harrington L.S., Warboys C.M., Warner T.D. Role of shear stress in endothelial cell morphology and expression of cyclooxygenase isoforms. Arter. Thromb. Vasc. Biol. 31:384–414. 2011. https://doi.org/10.1161/ATVBAHA.110.214031
Sanchez D., Johnson N., Li C., Novak P., Rheinlander J. Noncontact measurement of the local mechanical properties of living cells using pressure applied via a pipette. Biophys. J. 95:3017–27. 2008. https://doi.org/10.1529/biophysj.108.129551
O’Connell M.A., Snowden M.E., McKelvey K., Gayet F., Shirley I., Haddleton D.M., Unwin P.R. Positionable vertical microfluidic cell based on electromigration in a theta pipet. Langmuir 30:10011–10018. 2014. https://doi.org/10.1021/la5020412
McKelvey K., O’Connell M.A., Unwin P.R. Meniscus confined fabrication of multidimensional conducting polymer nanostructures with scanning electrochemical cell microscopy (SECCM). Chem. Comm. 49:2986–2988. 2013. https://doi.org/10.1039/C3CC00104K
Paolo A., Sergiy T., Jan C. et al. Electrochemical nanoprobes for single-cell analysis. ACS Nano. 2014. Vol. 8, no. 1. PP. 875–884. https://doi.org/10.1021/nn405612q
Bruckbauer A., Ying L., Rothery A.M., Zhou D., Shevchuk A.I., Abell C., Korchev Y.E., Klenerman D. Writing with DNA and Protein Using a Nanopipet for Controlled Delivery. J. Am. Chem. Soc. 124 (30):8810–8811. 2002. https://doi.org/10.1021/ja026816c
Rodolfa K.T., Bruckbauer A., Zhou D., Shevchuk A.I., Korchev Y.E., Klenerman D. Nanoscale Pipetting for Controlled Chemistry in Small Arrayed Water Droplets Using a Double-Barrel Pipet. Nano Lett. 6(2) 252–257. 2006. https://doi.org/10.1021/nl052215i
Actis P., Maalouf M.M., Kim H.J., Lohith A., Vilozny B., Seger R.A., Pourmand N. Compartmental genomics in living cells revealed by single-cell nanobiopsy. ACS Nano 8:546–553. 2014. https://doi.rg/10.1021/nn405097u
Nashimoto Y., Takahashi Y., Zhou Y., Ito H., Ida H., Ino K., Matsue T., Shiku H. Evaluation of mRNA localization using double barrel scanning ion conductance microscopy. ACS Nano 10:6915–6922. 2016. https://doi.org/10.1021/acsnano.6b02753
Zhang X. et al. ZEB1 confers chemotherapeutic resistance to breast cancer by activating ATM. Cell Death and Disease 9:57. 2018. https://doi.org/10.1038/s41419-017-0087-3
Yaminsky I.V., Akhmetova A.I., Meshkov G.B. FemtoScan Online software and visualization of nanoobjects in high resolution microscopy. NANOINDUSTRY. 2018. V. 11. 6 (85). PP. 414–416. http://dx.doi.org/10.22184/1993-8578.2018.11.6.414.416
Декларация о конфликте интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликтов интересов или личных отношений, которые могли бы повлиять на работу, представленную в данной статье.
Научная статья
СКАНИРУЮЩАЯ КАПИЛЛЯРНАЯ МИКРОСКОПИЯ: ВИЗУАЛИЗАЦИЯ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК
И.В.Яминский1, 2, 3, д.ф.-м.н., проф. МГУ им. М.В. Ломоносова, физический и химический факультеты, генеральный директор Центра перспективных технологий, директор Энергоэффективных технологий, ORCID: 0000-0001-8731-3947 / yaminsky@nanoscopy.ru
А.И.Ахметова1, 2, 3, инженер НИИ ФХБ имени А.Н. Белозерского МГУ, ведущий специалист Центра перспективных технологий и Энергоэффективных технологий, ORCID: 0000-0002-5115-8030
Т.О.Советников1, 2, инженер, ORCID: 0000-0001-6541-8932
М.А.Тихомирова1, 5 м.н.с., ORCID: 0000-0001-5675-9188
Шуанг Янг4, проф., ORCID: 0000-0002-4779-8553
Аннотация. Сканирующая капиллярная микроскопия (или сканирующая ион-проводящая микроскопия) – одна из методик сканирующей зондовой микроскопии, основанная на использовании нанокапилляров. Важным преимуществом СКМ перед остальными методами является несиловое воздействие на объект исследования в процессе измерения, а также возможность проводить исследования в естественной среде – в жидкости, вследствие чего эта методика стала активно использоваться в биологических и медицинских исследованиях. Еще одним оригинальным преимуществом СКМ является использование двухканальных капилляров, что позволяет применять эту методику в качестве сенсора, например, для измерения активных форм кислорода вблизи клетки.
Ключевые слова: сканирующая капиллярная микроскопия, мезенхимальный и мезенхимоподобный фенотип, морфологический портрет, раковые клетки, карцинома человека
Для цитирования: И.В. Яминский, А.И. Ахметова, Т.О. Советников, М.А. Тихомирова, Шуанг Янг. Сканирующая капиллярная микроскопия: визуализация опухолевых клеток. НАНОИНДУСТРИЯ. 2022. Т. 15, № 3–4. С. 168–173. https://doi.org/10.22184/1993-8578.2022.15.3-4.168.173
ВВЕДЕНИЕ
Сканирующая капиллярная микроскопия (СКМ) успешно используется для исследования механических реакций живых клеток, например, для оценки объема живых эндотелиальных клеток под влиянием гемодинамического сдвигового напряжения в кровеносных сосудах [1] и для оценки жесткости плазматической мембраны при приложенном гидростатическом давлении [2].
Использование капилляра в качестве резервуара имеет потенциальное применение для доставки определенных молекул и терапевтических средств в конкретную клетку или субклеточную область. В этом отношении двухканальные капилляры уже использовались для доставки микрочастиц [3] и полимеров [4] в живые клетки корней растений.
В работе [5] представлена методика изготовления углеродных наноэлектродов для внутриклеточных электрохимических исследований, в частности, модификация наноэлектрода с помощью платины позволила зарегистрировать концентрацию активных форм кислорода вблизи и внутри клеток гиппокампа.
С высокой точностью осуществлялось нанесение биотинилированной ДНК на стеклянную подложку, покрытую стрептавидином, и протеина G на положительно заряженную стеклянную подложку [6]. Также возможно прецизионное нанесение на подложку фемто- и аттолитровых капель воды, при котором достигается высокая равномерность величины подачи, и, как следствие, возможно добавление одинаковых порций воды; более того, возможно добавление реагента из капилляра при сохранении объема капли [7].
Помимо возможности доставки материала на поверхность, капилляр также позволяет выполнять одноклеточную нанобиопсию путем извлечения небольшого количества материала изнутри клетки, которая затем подвергается дальнейшему анализу [8, 9]. Такое извлечение является ценным, поскольку последующий анализ может быть привязан к местоположению клетки или использоваться для сравнения свойств ряда клеток в группе.
Применимо к исследованию раковых клеток капиллярная микроскопия может дать существенную информацию для дальнейшего лечения.
Раковое заболевание обладает способностью развивать устойчивость к традиционным методам лечения, и растущая распространенность этих лекарственно-устойчивых форм онкологии требует дальнейших углубленных исследований и разработки эффективных методов лечения.
Хотя многие виды онкологии изначально подвержены химиотерапии, со временем они могут развить резистентность с помощью мутации ДНК и метаболических изменений, которые способствуют ингибированию и деградации лекарственного средства.
При исследовании людей с раком молочной железы было показано, что пациенты с опухолями, экспрессирующими высокие уровни ZEB1 (белок цинкового пальца), плохо реагировали на химиотерапию [10]. В данном случае СКМ позволяет исследовать мезенхимальный или мезенхимоподобный фенотип и сформировать морфологический портрет опухолевых клеток, определить такие признаки, как форма, шероховатость, размеры клеток и ядра, расположение ядер (наличие скученности ядер), количество внутриклеточного вещества и др.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Установка СКМ собрана на базе инвертированного оптического микроскопа Nikon Ti-U. В схеме самого микроскопа задействованы: высоковольтный усилитель, подающий сигнал на пьезокерамические подвижки; высокочувствительный усилитель ионного тока, создающий разницу потенциалов между электродами и измеряющий напряжение текущего ионного тока (усилитель имеет регулятор, позволяющий подстраивать коэффициент преобразования ток-напряжение от 0.5 до 1000 мВ/пА) и цифровой контроллер (блок управления) микроскопа, принимающий сигнал с усилителя тока и подающий управляющие сигналы на выходной усилитель, для подачи напряжения на пьезокерамический манипулятор.
Клетки карциномы человека (HeLa, Российская коллекция клеточных культур человека, животных и растений, Институт цитологии, Санкт-Петербург, Россия) выращивали в среде ДМЕМ (ПанЭко, Москва, Россия) с добавлением 10% термоинактивированной фетальной бычьей сыворотки (HyClone, Logan, UT, США), 2 мМ L-глутамина (ПанЭко, Москва, Россия) и раствора антибиотика-антимикотика (Gibco, Waltham, MA, USA). Фиксация клеток проводилась в 3,7 % параформальдегиде (PFA) в течение 10 минут, далее клетки отмывались в физрастворе (0,9 M NaCl), который в дальнейшем служил и в качестве электролитической среды в процессе сканирования.
Сканирование проводилось капилляром с выходным отверстием около 100 нм, амплитуда и частота колебаний в режиме прерывистого контакта (hopping-mode) составляли 1 мкм и 15 Гц, соответственно. Контрольная точка падения величины ионного тока составляла 1,2 % от величины тока на удалении от образца. Размер кадра 10,3 × 10,3 мкм2, разрешение 512 × 512 точек.
Постобработка снимков проводилась в ПО ФемтоСкан Онлайн [11] посредством медианной фильтрации и выравнивания уровня подложки по выбранным участкам подложки на полученном изображении.
РЕЗУЛЬТАТЫ
В инвертированном оптическом микроскопе наблюдалась организация клеточных структур на подложке: клетки собираются в островки, при этом заметны характерные отростки в местах присоединения клеток к подложке (Рис.1).
На рис.2 представлены изображения клеток, полученные с помощью сканирующего капиллярного мироскопа. Наблюдается морфология клеточной поверхности, которая также прямо указывает на организацию субмембранных структур: различимо ядрышко клетки (показано желтым градиентом), что отчетливо соотносится с данными оптической микроскопии.
На рис.4 представлены изображения отростков клетки в 2D и 3D виде.
Сканирующая капиллярная микроскопия позволяет не только визуализировать объекты в трехмерном масштабе, но и дает возможность получать и использовать ряд экспериментальных данных в диагностических целях. На основе полученных изображений измерена средняя шероховатость поверхности клеток, которая в области клеточных ядер составляет по показателю Ra = 0,4 мкм (среднее по модулю), по среднеквадратичному отклонению шероховатость Rq составила 0,5 мкм, а в области отростков 0,045 и 0,06 мкм соответственно, что практически в 10 раз меньше.
ВЫВОДЫ
СКМ имеет особую значимость в исследовании живых систем. В биоприложениях интерес могут представлять не только получение информации о морфологии объектов, измерение локальных биотоков и т.д., но и методики адресной доставки агентов к исследуемому образцу, что позволяет изучать его реакцию на внешнее воздействие и, как следствие, получать качественно новую и более значимую информацию о процессе его жизнедеятельности.
БЛАГОДАРНОСТИ
Исследование выполнено при финансовой поддержке РФФИ и Лондонского Королевского Общества № 21-58-10005, РФФИ, проект № 20-32-90036. Работа выполнена при финансовой поддержке Фонда содействия инновациям, проект № 71108, договор 0071108. Работа выполнена при содействии компании ООО "Эндор" (Москва).
ИНФОРМАЦИЯ О РЕЦЕНЗИРОВАНИИ
Редакция благодарит анонимного рецензента (рецензентов) за их вклад в рецензирование этой работы, а также за размещение статей на сайте журнала и передачу их в электронном виде в НЭБ eLIBRARY.RU.
ЛИТЕРАТУРА / REFERENCES
Potter C.M.F., Lundberg M.H., Harrington L.S., Warboys C.M., Warner T.D. Role of shear stress in endothelial cell morphology and expression of cyclooxygenase isoforms. Arter. Thromb. Vasc. Biol. 31:384–414. 2011. https://doi.org/10.1161/ATVBAHA.110.214031
Sanchez D., Johnson N., Li C., Novak P., Rheinlander J. Noncontact measurement of the local mechanical properties of living cells using pressure applied via a pipette. Biophys. J. 95:3017–27. 2008. https://doi.org/10.1529/biophysj.108.129551
O’Connell M.A., Snowden M.E., McKelvey K., Gayet F., Shirley I., Haddleton D.M., Unwin P.R. Positionable vertical microfluidic cell based on electromigration in a theta pipet. Langmuir 30:10011–10018. 2014. https://doi.org/10.1021/la5020412
McKelvey K., O’Connell M.A., Unwin P.R. Meniscus confined fabrication of multidimensional conducting polymer nanostructures with scanning electrochemical cell microscopy (SECCM). Chem. Comm. 49:2986–2988. 2013. https://doi.org/10.1039/C3CC00104K
Paolo A., Sergiy T., Jan C. et al. Electrochemical nanoprobes for single-cell analysis. ACS Nano. 2014. Vol. 8, no. 1. PP. 875–884. https://doi.org/10.1021/nn405612q
Bruckbauer A., Ying L., Rothery A.M., Zhou D., Shevchuk A.I., Abell C., Korchev Y.E., Klenerman D. Writing with DNA and Protein Using a Nanopipet for Controlled Delivery. J. Am. Chem. Soc. 124 (30):8810–8811. 2002. https://doi.org/10.1021/ja026816c
Rodolfa K.T., Bruckbauer A., Zhou D., Shevchuk A.I., Korchev Y.E., Klenerman D. Nanoscale Pipetting for Controlled Chemistry in Small Arrayed Water Droplets Using a Double-Barrel Pipet. Nano Lett. 6(2) 252–257. 2006. https://doi.org/10.1021/nl052215i
Actis P., Maalouf M.M., Kim H.J., Lohith A., Vilozny B., Seger R.A., Pourmand N. Compartmental genomics in living cells revealed by single-cell nanobiopsy. ACS Nano 8:546–553. 2014. https://doi.rg/10.1021/nn405097u
Nashimoto Y., Takahashi Y., Zhou Y., Ito H., Ida H., Ino K., Matsue T., Shiku H. Evaluation of mRNA localization using double barrel scanning ion conductance microscopy. ACS Nano 10:6915–6922. 2016. https://doi.org/10.1021/acsnano.6b02753
Zhang X. et al. ZEB1 confers chemotherapeutic resistance to breast cancer by activating ATM. Cell Death and Disease 9:57. 2018. https://doi.org/10.1038/s41419-017-0087-3
Yaminsky I.V., Akhmetova A.I., Meshkov G.B. FemtoScan Online software and visualization of nanoobjects in high resolution microscopy. NANOINDUSTRY. 2018. V. 11. 6 (85). PP. 414–416. http://dx.doi.org/10.22184/1993-8578.2018.11.6.414.416
Декларация о конфликте интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликтов интересов или личных отношений, которые могли бы повлиять на работу, представленную в данной статье.
Отзывы читателей
